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Otimização de protocolo para o isolamento de micrósporos visando a obtenção de plantas haplóides de trigo.
Makeli Chiesa, Adriano Michel

Última alteração: 17-10-2024

Resumo


O trigo representa o alimento básico da humanidade principalmente, da civilização ocidental. O melhoramento genético do trigo tem contribuído de forma significativa no aumento da produtividade e na viabilidade da cultura tanto em nível mundial quanto em nível de Brasil. Contudo, o processo de obtenção de novas cultivares através do melhoramento genético clássico se mostra muito oneroso uma vez que são necessárias várias gerações até a obtenção de linhagens não segregantes. A utilização de técnicas biotecnológicas como a cultura de anteras e/ou micrósporos imaturos têm auxiliado os programas de melhoramento reduzindo significativamente o tempo para a obtenção de uma nova cultivar. Nesse sentido, o presente trabalho teve por objetivo otimizar o processo de isolamento de micrósporos jovens visando a obtenção de plantas haplóides de trigo, estabelecendo o protocolo das soluções de purificação de micrósporos, realizando o isolamento dos micrósporos a partir da espiga, com o intituto de obter calos com potencial de regeneração em plantas haplóides de trigo. Foram utilizados genótipos de trigo cuja resposta androgenética já tenha sido comprovado através da cultura de anteras, os quais foram mantidos em câmara de cultura e/ou em casa de vegetação sob condições de temperatura e luminosidade controladas. As espigas foram coletadas antes da sua emissão visando obter maior número de anteras com os micrósporos no estádio mononucleado e submetidas ao pré-tratamento de frio, a 3º C por duas semanas. Após o pré-tratamento, as espiguetas foram destacadas da espiga e os micrósporos foram isolados através de trituração em blender com Manitol a 0,4 Molar seguido de filtragem e sequência de centrifugação até a formação de banda contendo os micrósporos concentrados. Realizou-se a multiplicação dos genótipos doadores de micrósporos e ao final do projeto ficou estabelecido o protocolo de isolamento sendo necessárias 20 espigas em cada extração, o qual deve ser centrifugado quatro vezes por cinco minutos em centrífuga refrigerada a 5º C, a 1200 giros,  para a obtenção do volume e concentração necessárias de micrósporos para a realização do plaqueamento visando a obtenção de plantas haplóides.

Palavras-chave


Homozigose; Androgênese; Duplo haplóide