Tamanho da fonte:
Utilização de diferentes conservantes para a preservação de amostras de tecido animal visando a extração do DNA
Última alteração: 27-10-2016
Resumo
Através do estudo das informações contidas no DNA é possível realizar diferentes análises como o diagnóstico de doenças genéticas e a genética forense. Entretanto, a decomposição das amostras pode provocar a degradação do DNA causando perdas no rendimento e na pureza. Assim, é importante a avaliação de métodos de conservação capazes de impedir a degradação do DNA em amostras biológicas. O objetivo deste trabalho foi analisar a eficiência de diferentes conservantes para a preservação de amostras de tecidos animais ao longo do tempo, visando a extração do DNA. Foram utilizadas amostras de 200 mg de tecido muscular bovino submetidas a seis tratamentos: sem conservante (A), álcool etílico 70% (B), álcool etílico absoluto (C), RNAlatter (D), tampão de extração (E) e DMSO 20% (F). O DNA foi extraído no primeiro dia e após 14, 28 e 60 dias de seis amostras em cada tratamento. O protocolo de extração realizado utiliza o detergente brometo de cetil-trimetil amônio (CTAB), na solução de lise celular. Após a extração a concentração de DNA foi verificada em espectrofotômetro por absorbância de luz no comprimento de onda de 260 nm, e a pureza através da razão entre a absorbância em 260 nm e 280 nm. Os resultados foram avaliados através da Correlação de Pearson, entre o tempo (dias) e a concentração do DNA e a diferença entre os tratamentos pelo teste de Kruskal-Wallis. Os resultados demonstraram a redução acentuada da concentração de DNA ao longo do tempo nas amostras sem conservante (A) justificando a utilização de conservantes. Após 60 dias a redução em relação à concentração de DNA inicial foi de 85% em A, 65% em B, 37% em C, 83% em D, 23% em E, e 63% com F. A concentração do DNA nas amostras apresentou correlação significativa (P<0,05) negativa com o tempo em A (r: -0,677), B (r: -0,641), D (r: -0,597) e F (r: -0,736). Entretanto, a correlação não foi significativa (P>0,05) nos tratamentos C (r: -0,364) e E (r: -0,242). Embora a degradação nas amostras mantidas em RNAlatter, álcool etílico 70% e DMSO tenha sido semelhante às sem conservantes, a utilização de álcool etílico absoluto e de tampão de extração resultou em uma degradação significativamente menor (H: 26,32; P<0,05), indicando que estes podem preservar as amostras biológicas por um período maior de tempo. A preservação do DNA nas amostras submetidas aos diferentes conservantes analisados permitirá a sua utilização nas diferentes análises moleculares.
Palavras-chave
Biologia Molecular; Conservação; Extração de DNA
Texto completo:
PDF